Bagaimana Cara Kerja Tes Genetik Resistansi HIV?

Bahkan untuk orang dengan kepatuhan terapi yang optimal, beberapa tingkat resistensi obat HIV diperkirakan berkembang seiring waktu karena mutasi alami virus. Dalam kasus lain, resistansi dapat berkembang dengan cepat ketika kepatuhan suboptimal memungkinkan populasi HIV yang resisten untuk berkembang, yang pada akhirnya menyebabkan kegagalan pengobatan.

Ketika kegagalan pengobatan benar-benar terjadi, kombinasi obat alternatif harus dipilih untuk menekan populasi virus resisten yang baru ini. Pengujian ketahanan genetik membantu memfasilitasi hal ini dengan mengidentifikasi jenis-jenis mutasi yang resistan pada "kumpulan virus" seseorang, sambil memastikan seberapa rentan virus-virus itu terhadap kemungkinan agen antiretroviral.

Dua alat utama digunakan untuk tes resistensi genetik pada HIV: Uji genotip HIV dan Uji fenotipik HIV.

Apa itu Genotipe dan Fenotip?

Menurut definisi, genotipe hanyalah susunan genetik suatu organisme, sedangkan fenotipe adalah karakteristik atau sifat yang dapat diamati dari organisme itu.

Tes genotip berfungsi (atau genotip) berfungsi dengan mengidentifikasi instruksi yang diwariskan dalam pengkodean genetik, atau DNA. Tes fenotipik (atau fenotip) mengkonfirmasi ekspresi instruksi tersebut di bawah pengaruh kondisi lingkungan yang berbeda.

Sementara hubungan antara genotipe dan fenotipe tidak absolut, genotipe sering dapat menjadi prediksi fenotipe, terutama ketika perubahan dalam kode genetik memberikan perubahan yang diharapkan dalam sifat atau karakteristik - seperti dalam kasus mengembangkan resistensi obat.

Phenotyping, di sisi lain, menegaskan "di sini dan sekarang." Ini bertujuan untuk menilai reaksi suatu organisme terhadap perubahan spesifik dalam tekanan lingkungan - seperti ketika HIV terpapar pada obat yang berbeda dan / atau konsentrasi obat.

Menjelaskan Genotipe HIV

Genotipe HIV umumnya merupakan teknologi yang paling umum digunakan untuk tes resistansi. Tujuan dari pengujian ini adalah untuk mendeteksi mutasi genetik spesifik di lelucon wilayah virus ' genom (atau kode genetik). Ini adalah wilayah di mana enzim transkriptase, protease, dan integrase terbalik - target sebagian besar obat antiretroviral - dikodekan pada rantai DNA.

Dengan terlebih dahulu memperkuat genom HIV menggunakan teknologi polymerase chain reaction (PCR), teknisi laboratorium dapat mengurutkan (atau "memetakan") genetika virus menggunakan berbagai teknologi pendeteksi mutasi.

Mutasi tesis (atau akumulasi mutasi) ditafsirkan oleh teknisi yang menganalisis hubungan antara mutasi yang diidentifikasi dan kerentanan virus yang diharapkan terhadap berbagai obat antiretroviral. Database online dapat membantu dengan membandingkan urutan tes dengan prototipe virus "tipe liar" (mis., HIV yang tidak mengandung mutasi yang resisten).

Interpretasi dari tes-tes ini digunakan untuk menentukan kerentanan obat, dengan jumlah mutasi kunci yang lebih besar yang memberikan tingkat resistensi obat yang lebih tinggi.

Menjelaskan Phenoytyping HIV

Fenotip HIV menilai pertumbuhan HIV seseorang di hadapan obat, kemudian membandingkannya dengan pertumbuhan kontrol, virus tipe liar dalam obat yang sama.

Seperti halnya tes genotipik, tes fenotipik memperkuat wilayah muntah dari genom HIV. Bagian kode genetik ini kemudian "dicangkokkan" ke klon tipe liar menggunakan teknologi DNA rekombinan. Virus rekombinan yang dihasilkan digunakan untuk menginfeksi sel mamalia secara in vitro (di laboratorium).

Sampel virus kemudian terpapar pada peningkatan konsentrasi obat antiretroviral yang berbeda hingga tercapai penekanan virus 50% dan 90%. Konsentrasi kemudian dibandingkan dengan hasil dari kontrol, sampel tipe liar.

Perubahan "lipatan" relatif memberikan kisaran nilai di mana kerentanan obat ditentukan. Perubahan empat kali lipat berarti bahwa empat kali jumlah obat diperlukan untuk mencapai penekanan virus dibandingkan dengan jenis liar. Semakin besar nilai lipatnya, semakin rentan virus terhadap pengobatan tertentu.

Nilai-nilai ini kemudian ditempatkan dalam rentang klinis yang lebih rendah dan klinis atas, dengan nilai atas memberikan tingkat resistensi obat yang lebih tinggi. (Lihat contoh laporan.)

Kapan Tes Resistensi Genetik Dilakukan?

Di A.S., tes resistansi genetik secara tradisional dilakukan pada pasien yang belum pernah menggunakan pengobatan untuk menentukan apakah mereka memiliki resistansi obat "didapat". Penelitian di AS menunjukkan bahwa antara 6% dan 16% virus yang ditularkan akan resistan terhadap setidaknya satu obat antiretroviral, sementara hampir 5% akan resistan terhadap lebih dari satu kelas obat.

Tes resistansi genetik juga digunakan ketika resistensi obat dicurigai pada individu yang menjalani terapi. Tes dilakukan ketika pasien mengambil rejimen yang gagal atau dalam waktu empat minggu setelah penghentian pengobatan jika viral load lebih dari 500. Pengujian genotip umumnya lebih disukai dalam hal ini karena biayanya lebih murah, memiliki waktu penyelesaian yang lebih cepat, dan menawarkan sensitivitas yang lebih besar untuk mendeteksi campuran virus tipe liar dan tahan.

Kombinasi pengujian fenotipik dan genotipik umumnya lebih disukai untuk orang-orang dengan resistensi multi-obat yang kompleks, terutama bagi mereka yang terpajan dengan protease inhibitor.